Preparação de Meios de Cultura

Material:
Material de vidro:

• Proveta de 250 mL
• 3 vidros de relógio
• 3 varetas de vidro
• 3 erlenmeyers de 250 mL com rolha de algodão

Material diverso:

• Algodão cardado
• Gaze
• 3 espátulas
• 3 Meios de cultura desidratados (comercial)
• 5 mL de NaOH 1N
• 5 mL de HCl 1N
• 2 lamparinas de álcool
• Algodão hidrófilo
• Álcool etílico a 96 %
• Marcador de acetato
• Fósforos
• Balança de precisão
• Medidor de pH
• Placa de aquecimento
• Recipiente para promover o banho-maria (ex: cafeteira)
• Folha de alumínio

Execução:

1. Pesar a quantidade de Meio de Cultura desidratado correspondente a 250 mL de meio e transferir para um erlenmeyer de 250 mL.
2. Perfazer com água destilada até 250 mL.
3. Agitar com uma vareta de vidro até dissolver completamente.
4. Ajustar o pH de acordo com as indicações da embalagem.
5. Tapar o erlenmeyer com a rolha de algodão e colocar em banho de água a 100º C para cozer o meio, agitando regularmente e de acordo com as indicações da embalagem.
6. Retirar o erlenmeyer do banho de água, deixar arrefecer à temperatura ambiente e guardar no frigorífico a 4ºC.

I – Chromocult – Coliformes Totais

1. Dissolver 6,625 g em 250 mL de água destilada, em banho-maria, agitando regularmente até o meio de cultura se tenha dissolvido completamente.
2. Acertar o pH: 6,8 ± 0,2 a 25ºC.
3. Levar à ebulição.
4. Deixar arrefecer à temperatura de 50ºC.
5. Verter em placa de Petri, aproximadamente 6 mL.

II – M-FC-Agar – Coliformes fecais 

1. Preparar uma solução de 0,8 g de NaOH 0,2 N em 10 mL de água e adicionar-lhe 0,1 g de ácido rosólico.
2. Dissolver 13 g em 250 mL de água destilada, aquecendo em banho-maria, agitando regularmente até que o meio de cultura se tenha dissolvido por completo.
3. Acertar o pH: 7,0 ± 0,2 a 25ºC.
4. Aquecer em banho-maria durante 20 minutos.
5. Nos últimos 2 minutos, misturar com a solução preparada anteriormente.
6. Deixar arrefecer à temperatura de 50ºC.
7. Verter em placas de Petri, aproximadamente 6 mL.

III – Slanetz and Bartley – Estreptococus fecais

1. Dissolver 10,375 g em 250 mL de água destilada, em banho-maria, agitando regularmente até que o meio de cultura se tenha dissolvido completamente.
2. Acertar o pH: 7,2 ± 0,2 a 25ºC.
3. Levar à ebulição durante 20 minutos.
4. Deixar arrefecer à temperatura de 50ºC.
5. Verter em placas de Petri, aproximadamente 6 mL.

NOTA: Todo o material sujo deve ser colocado em tabuleiro próprio para recolher à sala de lavagem e esterilização.